Категории

Послеоперационная лапароскопия в диагностике и динамический лапароскопический адгезиолизису в лечении спаечной болезни часть 3

12.02.2017

Состояние лимфогемпоетичнои системы (ЛГПС) животных оценивали на 7, 14, 21 и двадцать восьмой день после индукции патологии с использованием гематологических, иммунологических, биохимических, морфологических, гистологических методов и культивирования клеток КМ в системах in vitro и in vivo. В частности, с помощью ФИТЦ-меченых моноклональных антител (Galtag, США) в CD-4 и CD-8 структур мембран были определены субпопуляционный состав Т-клеток и иммунорегуляторный индекс (ИРИ), выражающая отношение CD-4 + / CD-8 + . Активность естественных киллеров (НК) спленоцитов крыс определяли вычислением индекса цитотоксичности, уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови — общепринятым методом.
проект рентген кабинета
Уровень метаболизма животных в динамике развития АИЗ оценивали по содержанию гидроперекисей липидов (ГПЛ) в тесте с 2-тиобарбитуровой кислотой; глутатионпероксидазну (ГТО) и глутатионредуктазну (ГР) активности регистрировали флуориметрическим методом на основе уменьшения НАДФН2. На основании проведенных исследований были определены начало хронического течения данных патологий: для АА — четырнадцатый день, а для ЕАЕ — двадцать первый день. Установления иммунологических признаков, меняются наиболее манифестно в этот период (снижение ИРИ и константы ЦИК), было основанием для выбора времени забора КС, получали из бедренных костей путем вымывания средой 199 с добавлением 10% — ной эмбриональной телячьей сыворотки и 2% — го цитрата натрия. Растворы с различными осмолярность (100, 150, 200, 600, 1200, 2400 мОсм / кг) и рН (5,0; 6,0; 8,0; 9,0) были выбраны в качестве отдельных факторы, модифицирующие морфофункциональное состояние клеток КМ на этапах криоконсервирования. На этапе еквилибрации и выбора криопротектора использовали глицерин и диметилсульфоксид (ДМСО) в 5, 7, 10 и 15% — й (конечной) концентрации. Экспозиция клеток КМ с криопротекторами проводилась при температуре 4 ° С в течение 10 минут — времени, необходимого для оптимального насыщения клеток криопротекторами Холодный В. С., 2002. Проведенные исследования показали, что глицерин во всех вышеуказанных концентрациях и 15% — й ДМСО негативно влияли на клетки КМ. В связи с этим в дальнейших экспериментах по оценке влияния различных скоростей охлаждения на морфофункциональные сохранность миелокариоцитив были использованы 5, 7 и 10% — ной концентрации ДМСО. Криоконсервирование суспензии КМ осуществляли на программном заморожувачи «Cryoson» (Германия) в криоконтейнерах фирмы Nunc объемом 1 мл (6,0×106 кл / мл). В работе апробувани программы криоконсервирование со скоростями охлаждения:

Отогревание суспензии проводили на водяной бане при температуре 38-40 ° С в течение 40-50 с. После криоконсервирование клетки КМ отмывали от криопротектора путем медленного добавления равного объема рабочего раствора и последующего центрифугирования. До и после криоконсервирования оценивали: жизнеспособность клеток КМ методом суправитально окрашивания 0,2% — ным раствором трипанового синего; качественный состав ядровмисних клеток на мазках, окрашенных азур-II-эозином; адгезивную способность клеток КМ; фагоцитарную активность (фагоцитарный индекс (ФИ) — процент клеток, которые фагоцитувалы; фагоцитарное число (ФЧ) — число захваченных одной клеткой микроорганизмов; абсолютный показатель фагоцитарной активности миелокариоцитив — АПФАМ, который определялся по формуле: АПФАМ = ФИхФЧх (абс. число кл / мкл суспензии х106)). Содержание кроветворных предшественников грануломоноцитопоезу (КОЕ-ГМ) оценивали по методу С. И. Шерешков, 1974, в нативном КМ на 7-е сутки, в криоконсервированных — на 14-е сутки культивирования с учетом факта временной ингибирования пролиферативной активности КОЕ-ГМ после криоконсервирования. Интегральный показатель КОЕ-ГМ — это суммарное количество предшественников, формирующих структуры, до 20 клеток — кластеры и более 20 клеток — колонии. Для оценки распределения в КМ кроветворных клеток с разной степенью потентности (менее дифференцированные предшественники формируют колонии, более дифференцированные — кластеры) был введен индекс пролиферативной активности (ИПА КОЕ-ГМ), представляющий собой отношение колониеобразующих предшественников в кластероутворюючих. Кроветворные предшественники, формирующие колонии в селезенку летально облученных мышей (КУОС), определяли общепринятым методом на восьмой день — КУОС-8 (более дифференцированные) и четырнадцатый день — КУОС-14 (менее дифференцированные) после введения КМ. Содержание колоний различных типов в селезенку оценивали на гистологических срезах. С целью объективизации полученных данных о состоянии КМ животных с АИЗ до и после криоконсервирования было использовано индекс суммарного степени отклонения (ССВ), что является суммой значений отклонений от контроля всех показателей, которая разделена на 100 и выраженная в условных единицах. Более удовлетворительными были результаты по меньшей ССВ. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по методу Стьюдента-Фишера. Результаты и их обсуждение Неоднократно отмечалось, что АИЗ является патологией всего организма, тем самым подчеркивая „ заинтересованность "различных компартментов иммунной системы в их развитии. В связи с этим на первом этапе выполнения работы было проведено исследование состояния ЛГПС для выявления в ней нарушений при развитии данных патологий. Сравнительная оценка развития аутоиммунным процесса показала как общность изменений иммунологических, гематологических и биохимических показателей при АА и ЕАЕ, так и различия. Кроме того, изменения в иммунной системе отмечались уже на этапе доклинической манифестации патологий и опять оказывались в зависимости от вида АИЗ. Так, при исследовании клеточного звена иммунитета было установлено угнетение киллерной активности клеток селезенки (естественные киллеры — ПК) во все сроки развития АА, что согласуется с данными литературы о дефекте цитолитической активности ПК при нарастании активности и тяжести РА. В то же время при развитии ЭАЭ изменение содержания ПК носила волнообразный характер: снижение на седьмой день; рост до 14 суток и тенденция к снижению в период 21-28-й суток по сравнению с контролем. Важно, что при обоих патологиях происходила разбалансировки соотношение регуляторных субпопуляций Т-хелперов и Т-супрессоров в селезенке. Причем содержание последних снижался значительно интенсивнее, что характерно для развития АИЗ. В гуморальном звене отмечено накопление наиболее патогенных мелкодисперсных ЦИК (дЦИК) во все сроки развития обеих патологий, которые исследуются. Однако при развитии АА их накопления было больше, чем при ЕАЕ. Это явление закономерно, поскольку известно, что дЦИК является потенциальным фактором иммунной повреждения тканей синовиальной оболочки сустава при РА. В гематологическом статусе уже на седьмой день развития АИЗ на фоне лейкоцитоза, обусловленного повышением количества сегментоядерных нейтрофилов, наблюдалось увеличение СОЭ по сравнению с контролем и уменьшение содержания гемоглобина в крови. Эти признаки характерны для воспалительного процесса.