Категории

Послеоперационная лапароскопия в диагностике и динамический лапароскопический адгезиолизису в лечении спаечной болезни часть 2

08.12.2014

Объект исследования. Режимы криоконсервирования с различными концентрациями криопротектора и скоростями замораживания клеток костного мозга здоровых животных и с АИЗ. Предмет исследования. Клетки костного мозга здоровых животных и с АИЗ (АА и ЕАЕ). Методы исследования: гематологические, иммунологические, биохимические, морфологические, гистологические, а также методы культивирования клеток костного мозга в системах in vitro и in vivo. Научная новизна полученных результатов. Впервые проведен сравнительный анализ гемопоэтической системы животных при развитии различных АИЗ, как АА и ЕАЕ. Отмечено, что изменения этого компартмента организма обусловлены структурно-функциональной модификацией клеточно-тканевых субстратов иммунокомпетентных сферы и выраженными изменениями метаболических процессов. Новыми результаты, демонстрирующие зависимость морфофункциональных перестроек в гемопоэтических системе от вида АИЗ, разнонаправленного изменения ряда показателей состояния миелокариоцитив, а также функционального статуса кроветворных предшественников КМ животных при этих формах АИЗ. Впервые проведена комплексная оценка воздействия физико-химических факторов, которые реализуются в процессе криоконсервирования на морфологические и функциональные показатели клеток КМ животных с АИЗ в системах in vitro и in vivo. Показано, что идентичные условия криоконсервирование КМ здоровых доноров и с АИЗ обеспечивали не только различную сохранность кроветворных предшественников, реализующих функциональный потенциал in vitro и in vivo, но и перераспределение в этих компартментах предшественников с разной степенью комитованости. В результате оптимальными в отношении обеспечения функциональной полноценности клеток животных с АИЗ есть разные условия криоконсервирования. Кроме того, установлен уникальный эффект „ реставрации "функции кроветворных предшественников разного уровня дифференцировки КМ животных с АИЗ при определенных условиях криоконсервирования. На основании полученных результатов сделан важный вывод, что клетки КМ при развитии в организме АИЗ, то есть с измененным исходным структурно-функциональным статусом, имеют принципиальные отличия ответа на действие реализованных в процессе криоконсервирования физико-химических факторов. Этот тезис подтверждается полученными новыми данными о существенные различия ответы клеток КМ здоровых животных и с АИЗ на отдельные факторы криоконсервирование в системе in vitro. Практическое значение полученных результатов. Полученные данные подчеркивают важность и определяют необходимость учета выходного морфофункционального состояния КМ, в частности, при развитии в организме АИЗ, оптимизации методов его криоконсервирование и повышения эффективности применения при аутотрансплантации. Роль отдельных факторов криоконсервирования (осмолярность и рН) в изменении структурно-функционального состояния клеток КМ животных с АИЗ может быть учтена при анализе механизмов повреждения миелокариоцитив и „ адаптации "определенных режимов криоконсервирования в отношении КМ с измененным структурно-функциональным состоянием. Установлен факт „ управления «функционального потенциала кроветворных клеток КМ различной степени дифференцировки животных с АИЗ варьированием условий криоконсервирования открывает возможность в клинической практике „ регулировать» темп восстановления лимфогемопоезу реципиентов в посттрансплантационном период. Личный вклад диссертанта. Вынесенные на защиту положения и результаты получены диссертантом лично. Работы, относящиеся к теме диссертационной работы, опубликованы в соавторстве с научным руководителем темы член-корр. НАН Украины Гольцев А. Н. и другими сотрудниками отдела криопатофизиологии, отражают результаты общего планирования и проведения экспериментов, обобщения результатов и подготовки материалов к печати. В опубликованных с соавторами трудах личный вклад соискателя состоит: — в работах в участии в теоретической и практической разработке методов изучения состояния органов ЛГПС, в частности, клеток КМ при развитии АИЗ; — в работах в изучении изменений жизнеспособности, адгезивной способности и фагоцитарной активности клеток КМ животных с АИЗ после экспозиции их в растворах различной осмолярности и рН; — в работах в отработке методики культивирования нативных и криоконсервированных клеток КМ крыс с АА и ЕАЕ; — в работах в проведении различных режимов замораживания клеток КМ; — в работах в осуществлении определения активности ферментов антиоксидантной системы и уровня гидроперекисей липидов в гомогенатах печени крыс. Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на научных форумах: конференции молодых ученых ИПКиК НАН Украины „ Холод в биологии и медицине «(Харьков, 2003 и 2004 гг.) Научно-практической конференции „ Наука и социальные проблемы общества: медицина, фармация, биотехнологии» (Харьков, 2003 г.); Международном конгрессе по криобиологии и криомедицины „ Cryobiomol-2003 «(Коимбра, в 2003 г...) Конференции молодых ученых и студентов по молекулярной биологии и генетики „ 50 years of the double helix of the DNA and 30 anniversary of the Institute of molecular biology and genetics NAS of Ukraine» (Киев , 2003 г.); научно-практической конференции „ Современные аспекты репродуктологии, перинатальной медицины и криобиологии «(Харьков, 2003 г.), Международном конгрессе по криобиологии и криомедицины „ The 41stAnnual Meeting of the Society for Cryobiology — CRYO-2004» (Пекин, 2004 г.); I Украинской научной конференции „ Проблемы медицинской и биологической физики "(Харьков, 2004 г.); VIII Международной научной экологической конференции „ Актуальные проблемы сохранения устойчивости живых систем "(Белгород, 2004 г.). Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 14 работ, из которых пятая специализированных профессиональных изданиях и 1 патент на изобретение. Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах печатного текста, из которых 131 страница основного содержания. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, результатов собственных исследований, заключительной части, заключения, списка использованных источников литературы (23 страницы), включающий 209 первоисточников. Диссертация иллюстрирована 12 таблицами и 44 рисунками. Основное содержание работы Материалы и методы исследования Исследования были выполнены на белых 5-6 — месячных крысах-самцах массой 160-180 г (116 животных) и половозрелых мышах-самцах линии СВА массой 19-22 г (120 животных), которые содержались в стандартных условиях вивария Института проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины. Все манипуляции с животными осуществляли согласно положению «Европейской конвенции защиты позвоночных животных, используемых в экспериментальной и другой научной целью» (г...Страсбург, 1985 гг.). индукцию АА осуществляли субплантарним введением 0,2 мл полного адъюванта Фрейнда, содержащий 3 мг / мл Micobacterium tuberculosis, на 100 г массы животного методом Пирсона. ЕАЕ индуцировали введением в подушечки четырех лап крыс 0,4 мл гомогената аллогенной ткани спинного мозга в смеси с полным адъювантом Фрейнда. Контролем была группа здоровых животных.