Категории

Структурно-функциональные свойства гемагглютинина и нейраминидазы различных штаммов вируса гриппа н9n2 (реферат) часть 3

03.06.2017

Разная кинетика адсорбции, что найденная в исследованных штаммов, может указывать на то, что в процессе эволюции вируса возникли структурные различия — или в сайтах расщепления, или в рецептор-звьязуваючих сайтах, или в тех и других Для подтверждения существования таких замен и выяснения их характера для всех штаммов, изолированных в течение эпизоотии 2000 — 2004 г. г., а также референтного штамма вируса птиц, на основе изучения соответствующих нуклеотидных последовательностей сравнивали между собой первичную структуру обоих участков. Таблица 1 Константы скорости (К), время 50% — ной адсорбции (t50%) и константы связывания (Кб) штаммов вируса птичьего гриппа H9N2 на клетках МDCK и куриных эритроцитах

Штамм вируса, Дата изоляции Клетки MDCK Эритроциты курицы
К,% / мин . t50%, мин. Кб К,% / мин t50% , мин. Кб
ty / wisconsin-66, 1966 1,33+ 0,15 43,5+ 3,8 0,024 0,006 39,57+ 4,22 1,2+ 0,08 2,70 0,33
ty / 90710 /, 30.05.2000 3, 68 * + 0,32 15,0 * + 1,7 0,090 * 0,010 26,31 * + 1,98 1,8+ 0,20 1,18 * 0, 21
ty / 615 /, 30.01.2002 2,02 * + 0,18 35,5 * + 2,9 0,037 0,008 30,82+ 3,12 2,2 * + 0,24 0,48 * 0,05
ty / 965 /, 17.03.2002 2,02 * + 0,22 35,5 * + 3,2 0,037 0,007 21,18 * + 2,32 2 , 4 * + 0,22 0,55 * 0,06
СH / 1373 /, 14.07.2003 4,12 * + 0,46 11,5 * + 0,9 0,530 * 0,060 21,18 * + 1,95 2,8 * + 0,21 0,15 * 0,02
ty / 1562 /, 28.12.2003 2,97 * + 0,25 17,0 * + 1,5 0,060 * 0,009 21,18 * + 2,23 2,8 * + 0,19 0,15 * 0,02
ty / 1747 /, 15.05.2004 2,97 * + 0,25 17,0 * + 1,6 0,060 * 0,009 21,18 * + 1,95 2,8 * + 0,30 0,15 * 0,02
Примечание * — достоверно относительно референтного штамма (р <0,05). В каждой из них в течение эпизоотии произошло по две аминокислотные замены - в рецептор-звьязуваючому сайте в позициях 190 и 226, а в сайте расщепления - в позициях 326 и 329. В таблице 2, согласно хронологичним порядком, приведены аминокислотные замены, которые были найдены. Как видим, хотя в рецептор-звьязуваючому сайте частоты встречаемости Ала в позиции 190 и Лей в позиции 226 выше частот встречаемости Глу и ГЛН в этих позициях, обе замены достаточно равномерно рассеяны по исследованным штаммам вируса и не имеют регулярный характер на протяжении эпизоотии. В сайте расщепления, наоборот, замены аминокислот в позициях 327 и 329 имеют откровенно регулярный, направленный характер (табл. 3).
здоровые зубы
Для выяснения связи между этими заменами и функциональными свойствами HА проведено сопоставление первичных структур сайтов расщепления и соответствующих усредненных показателей кинетики адсорбции. Таблица 2 Аминокислотные остатки в позициях 190 и 226 рецептор-связывающего сайта HA штаммов вируса птичьего гриппа H9N2

Позиция Аминокис-лотний остаток Число штаммов % штаммов Дата изоляции
190 Глу 18 30 30.05.2000р., 20.01. 2002, 30.01.2002р., 10.02.2002р., 14.02.2002р, 05.03.2002 -19.04.2002 г..., 22.12.2002 — 21.01.2003 г..., 02.04.2003 г..., 30.10.2003 г..., 09.01.2004 г... —
190 Ала 43 70 23.05.2000. -25.12.2001 г..., 30.01 .2002 г., 03.02.2002 г..., 17.02.2002 г..., 11.12.2002 г... 24.02.2003 г..., 02.04.2003 г..., 06.04.2003 г... — 14.07. 2003г., 21.11.2003р. — 06.01.2004 г... 13.01.2004 г... — 15.05. 2004
226 ГЛН 23 38 30.05.2000р., 20.01.2002р., 14.02.2002р, 05.03.2002 — 19.04.2002г., 22.12.2002 — 24.02.2003 г..., 02.04.2003 г..., 06.04.2003 г... 13.04.2003 г..., 10.07.2003 г..., 22.12.2003 г... 28.12.2003 г..., 09.01.2004 г..., 15.05.2004 г...
226 Лей 38 62 23.05.2000. -25.12.2001 г..., 30.01.2002 г... — 10.02. 2002, 17.02.2002 г., 11.12.2002 г... 02.04.2003 г..., 06.04.2003 г..., 20.04.2003 г. — 26.05. 2003г., 14.07.2003 г... — 08.12.2003 г... 24.12.2003 г..., 28.12.2003 г ... 31.12.2003 г... — 06.01.2004 г..., 13.01.2004 г..., 14.01.2004 г... 15.05.2004 г...
В позиции 327 находится единственная замена — Вал → Арг, по которой референтный штамм отличается от всех штаммов H9N2. В результате этой замены родство вирусов к клеткам млекопитающих, сравнительно с референтным вирусом, существенно выросла, а в клетки птиц снизилась (табл. 4). Все остальные замены у штаммов, изолированных в течение эпизоотии, состоялись в позиции 329, причем в хронологическом порядке они практически регулярный характер: Ср → АСН → Лиз → Сер. В период 05.2000 — 12.2001 г... Штаммы, которые имели в позиции 329 август и АСН, составляли соответственно 3,3% и 4,9% от всех штаммов. С 12.2001 по 04.2003 г. Состоялась замена СЭР на Лиз, и штаммы с Лиз составляли 37,7%; с 02.2003 г... их начали выталкивать штаммы с сер в этой позиции (54,1%). С 11.2003 г... И до конца эпизоотии оказываются только эти штаммы. Таблица 3. Аминокислотные остатки в позициях 327 и 329 сайта расщепления HA в штаммов вируса гриппа H9N2

Позиция аминокислотной ный остаток Число штаммов % штаммов Дата изоляции
327 Вал 1 100 1966 г. , референтный вирус
327 Арг 61 100 30.05.2000-15.05.20004 г..., все штаммы
329 августа 1 100 1966, референтный вирус
329 августа 2 3 3 23.05.2000-30.05.2000 г..., эпизоотия
329 АСН 3 4,9 07.12.2001 г..., епизоотиия
329 Лиз 23 37,7 19.12.2001. -21.01.2003 г... 02.04., 30.10.2003 г..., эпизоотия
329 августа 33 54,1 24.02.03- 15.05.04 г..., эпизоотия